ABCA2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405934-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ABCA2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ABCA2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ABCA2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCA2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ABCA2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABCA2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCA2 kodiert einen ATP-bindenden Kassetten(ABC)-Transporter, der überwiegend an endolysosomalen Membranen lokalisiert ist und dort zur intrazellulären Lipidverarbeitung und zur Membranhomöostase beiträgt. Durch die Kopplung der ATP-Hydrolyse an den Substrattransport beeinflusst ABCA2 den Transport von Cholesterin und Sphingolipiden, die Vesikeldynamik sowie weiter gefasste Proteostase-Wege, die mit endozytischen und lysosomalen Funktionen verknüpft sind. Eine veränderte ABCA2-Expression wurde mit neurobiologisch relevanten Prozessen und einer Dysregulation des Lipidstoffwechsels in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten untersucht, in denen die Membranzusammensetzung Signalübertragung sowie zelluläre Stressantworten beeinflusst. Als großer, mehrfach membranspannender Transporter dient ABCA2 zudem als Modell zur Untersuchung der Regulation von ABC-Transportern, ihrer subzellulären Lokalisation und der Folgen gestörter Lipidtransportprozesse.
ABCA2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCA2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCA2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCA2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCA2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.