A20/TNFAIP3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423436-NIC

マウスTnfaip3は、炎症シグナル伝達の中枢的な負の制御因子として機能するユビキチン編集酵素A20/TNFAIP3をコードします。A20は、主要なシグナル伝達アダプター上のK63結合およびM1結合ユビキチン鎖を調節することで、TNFR、IL-1R、Toll様受容体などの受容体の下流におけるNF-κBおよびMAPK経路の活性化を抑制します。サイトカインによって駆動される転写プログラムを制御することを通じて、A20は自然免疫および獲得免疫の恒常性、細胞生存、ならびにストレス応答に影響を与えます。A20活性の制御不全は、持続的なNF-κB活性化が疾患関連の表現型に寄与する自己免疫、慢性炎症、腫瘍性シグナル伝達のモデルにおいて関与が示されています。

A20/TNFAIP3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Tnfaip3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tnfaip3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tnfaip3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tnfaip3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。