A-Raf CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401799

概要

ARAFは、RAFファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼであるA-Rafをコードしており、細胞膜で活性化されたRASをMAPK/ERKシグナル伝達カスケードへと結び付けます。A-Rafは、RAF–MEK–ERK経路の制御や、他の生存・アポトーシス関連プログラムとのクロストークを介して、増殖シグナル、分化、ストレス応答の調節に関与します。BRAFやRAF1の関与がより頻繁に示される一方で、RAFシグナルの破綻やARAFの発現・機能の変化は、がん化や細胞運命決定の変容に関連する異常な経路出力に寄与し得ます。中心的なシグナル伝達モジュールの構成要素として、A-RafはRAS駆動型シグナルの動態、フィードバック制御、疾患関連細胞モデルにおける経路の再配線などの文脈で研究されています。

A-Raf CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるARAF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ARAF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ARAFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、A-Rafタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、A-Rafシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ARAF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• A-Rafの機能に不可欠なARAFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ARAFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• A-Raf CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびA-Raf CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ARAF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  A-Raf HDRプラスミド（h）および A-Raf HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはARAFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のARAF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。