A-Raf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401799

Übersicht

ARAF kodiert A‑Raf, eine Serin/Threonin‑Kinase aus der RAF‑Familie, die aktiviertes RAS an der Plasmamembran mit der MAPK/ERK‑Signalkaskade koppelt. A‑Raf ist an der Regulation mitogener Signale, der Differenzierung und von Stressantworten beteiligt – über die Kontrolle des RAF–MEK–ERK‑Signalwegs sowie durch Crosstalk mit anderen Überlebens- und Apoptoseprogrammen. Obwohl BRAF und RAF1 häufiger im Fokus stehen, können eine fehlregulierte RAF‑Signalübertragung und eine veränderte Expression oder Funktion von ARAF zu einer aberranten Signalwegaktivität beitragen, die für onkogene Transformation und veränderte Zellschicksalsentscheidungen relevant ist. Als Bestandteil eines zentralen Signaltransduktionsmoduls wird A‑Raf u. a. in Zusammenhängen wie der Dynamik RAS‑getriebener Signalgebung, der Feedback‑Regulation und dem „Rewiring“ von Signalwegen in krankheitsrelevanten Zellmodellen untersucht.

Das A-Raf CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ARAF-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ARAF-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ARAF nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die A-Raf-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ARAF-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der A-Raf-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ARAF-Exone abzielen, die für die A-Raf-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ARAF-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom A-Raf CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom A-Raf CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ARAF-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das A-Raf HDR-Plasmid (h) und A-Raf HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ARAF-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ARAF-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.