20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403536

概要

PSMB2は、ヒト20Sプロテアソーム・コア粒子のβ2触媒サブユニットをコードしており、ATP依存的なタンパク質分解と抗原プロセシングを制御するユビキチン–プロテアソーム系の中核を成す構成要素です。26Sプロテアソームの一部として、20Sのβ2はポリユビキチン化基質のタンパク質分解切断に関与し、主要な制御因子を選択的に分解することで、プロテオスタシス、細胞周期の進行、ストレス応答、ならびにNF-κBなどのシグナル伝達経路を形成・調節します。プロテアソーム活性は、MHCクラスI提示用ペプチドの産生を通じて免疫監視に影響するとともに、DNA損傷応答やアポトーシス経路に関与するタンパク質の安定性にも作用します。プロテアソーム機能の破綻やサブユニット発現の変化は、がんの生物学、炎症性シグナル、神経変性におけるタンパク質凝集表現型などに関与するとされており、PSMB2はプロテオスタシスや細胞適応の機序を解明する研究における有用な標的となります。

20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPSMB2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PSMB2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PSMB2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、20S Proteasome β2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、20S Proteasome β2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PSMB2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 20S Proteasome β2の機能に不可欠なPSMB2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PSMB2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）および20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PSMB2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  20S Proteasome β2 HDRプラスミド（h）および 20S Proteasome β2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPSMB2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPSMB2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。