Plasmide CRISPR d'Activation (h) 20S Proteasome β1: sc-401676-ACT

PSMB1 code la sous-unité catalytique β1 du cœur du protéasome humain 20S, qui assure une protéolyse régulée au sein du complexe protéasome 26S. Cette activité est essentielle au renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine, au traitement des antigènes pour leur présentation par le CMH de classe I, ainsi qu’au maintien de la protéostasie lors de stress cellulaires. La fonction du protéasome s’intègre au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et aux voies de signalisation inflammatoires en modulant l’abondance de protéines régulatrices clés. Une activité du protéasome dérégulée et une expression altérée de PSMB1 sont fréquemment étudiées dans le contexte des programmes de survie des cellules cancéreuses, du stress protéotoxique des maladies neurodégénératives et de phénotypes liés à l’immunité.

20S Proteasome β1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

20S Proteasome β1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 20S Proteasome β1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 20S Proteasome β1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 20S Proteasome β1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.