15-LO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419090

概要

Alox8はアラキドン酸15-リポキシゲナーゼ2（15-LO2）をコードしており、これは非ヘム鉄型のジオキシゲナーゼとして、多価不飽和脂肪酸を酸素化して生理活性脂質メディエーターを産生します。マウス組織では、15-LO2由来のオキシリピンが、エイコサノイドおよび脂質過酸化ネットワークを介して、酸化還元バランス、膜脂質リモデリング、炎症シグナル伝達を調節し得ます。Alox8の活性は、サイトカイン産生や白血球動員に影響する局所のメディエータープロファイルを形成することで、自然免疫経路および上皮バリアの生物学と交差します。リポキシゲナーゼ依存性の脂質シグナルが破綻すると、炎症性表現型や代謝ストレス応答と関連することが示されており、Alox8は疾患に関連する脂質メディエーター回路を研究する上で有用な結節点となります。

15-LO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAlox8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Alox8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Alox8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、15-LO2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、15-LO2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Alox8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 15-LO2の機能に不可欠なAlox8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Alox8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 15-LO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および15-LO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Alox8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  15-LO2 HDRプラスミド（m）および 15-LO2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAlox8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAlox8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。