Plasmide CRISPR d'Activation (h) 15-LO: sc-401591-ACT

L’ALOX15 humain code la 15‑lipoxygénase (15‑LO), une dioxygénase à fer non héminique qui oxygène des acides gras polyinsaturés tels que l’acide arachidonique et l’acide linoléique afin de générer le 15‑HETE et des intermédiaires hydroperoxydés apparentés. Ces médiateurs lipidiques structurent les réseaux d’eicosanoïdes et de médiateurs spécialisés pro‑résolutifs, en influençant le remodelage oxydatif des lipides, la dynamique membranaire et des programmes transcriptionnels liés à la résolution de l’inflammation. L’activité d’ALOX15 a été associée, de manière dépendante du contexte, à la différenciation des cellules immunitaires, aux réponses de la barrière épithéliale et à la peroxydation lipidique liée à la ferroptose. Une signalisation 15‑LO dérégulée est fréquemment étudiée dans les maladies inflammatoires, l’athérosclérose, l’asthme et la biologie du cancer, en tant que moteur d’un déséquilibre des médiateurs lipidiques et de la signalisation du microenvironnement.

15-LO Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALOX15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

15-LO Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALOX15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALOX15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 15-LO. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALOX15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 15-LO au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 15-LO dans les cellules tumorales présentant une expression de ALOX15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.