γS-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419834

概要

CrygsはマウスγS-クリスタリンをコードしており、これは眼レンズ細胞質に豊富に存在する構造タンパク質です。γS-クリスタリンは、高密度に詰め込まれたタンパク質集合体を安定化することで、レンズの透明性と屈折特性の維持に寄与します。β/γ-クリスタリンスーパーファミリーの一員として、γS-クリスタリンは無核環境における長期的なタンパク質恒常性を支えます。この環境では、折りたたみの変化、凝集、あるいは翻訳後修飾が生じると、レンズの光透過が損なわれ得ます。クリスタリンのバランス破綻は、シャペロン介助型フォールディングやタンパク質の可溶性に生涯にわたって影響するストレス応答など、プロテオスタシス経路とも交差します。クリスタリンに対する遺伝学的・生化学的な撹乱は、レンズ混濁の表現型をモデル化し、白内障に関連するタンパク質凝集の基盤機構を研究するために広く用いられています。

γS-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCrygs遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Crygs内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crygsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γS-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γS-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Crygs欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γS-crystallinの機能に不可欠なCrygsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crygsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γS-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγS-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Crygs遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γS-crystallin HDRプラスミド（m）および γS-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrygsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCrygs標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。