γS-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419834

Descripción general

Crygs codifica la γS-cristalina del ratón, una proteína estructural muy abundante del citoplasma del cristalino ocular que contribuye a la transparencia y a las propiedades refractivas del cristalino al estabilizar complejos de proteínas densamente empaquetados. Como miembro de la superfamilia de las β/γ-cristalinas, la γS-cristalina favorece la homeostasis proteica a largo plazo en un entorno anucleado, donde el plegamiento alterado, la agregación o las modificaciones posraduccionales pueden interrumpir la transmisión de la luz a través del cristalino. La alteración del equilibrio de las cristalinas se relaciona con vías de proteostasis, incluidas el plegamiento asistido por chaperonas y las respuestas al estrés que influyen en la solubilidad de las proteínas a lo largo de la vida. Las perturbaciones genéticas y bioquímicas de las cristalinas se utilizan ampliamente para modelar fenotipos de opacidad del cristalino y para estudiar los mecanismos subyacentes a la agregación proteica asociada a cataratas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO γS-crystallin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Crygs en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Crygs junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Crygs tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína γS-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Crygs para la investigación de la señalización de γS-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Crygs críticos para la función de γS-crystallin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Crygs para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido γS-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido γS-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Crygs. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR γS-crystallin (m) y el plásmido HDR γS-crystallin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Crygs para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Crygs definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.