Particules Lentivirales d'Activation (h2) γ Enolase: sc-400763-LAC-2

Le gène humain ENO2 code la γ-énolase (énolase spécifique des neurones), une enzyme de la glycolyse qui catalyse la conversion du 2‑phosphoglycérate en phosphoénolpyruvate, reliant le métabolisme énergétique neuronal aux flux carbonés plus globaux ainsi qu’à la gestion du lactate et du pyruvate. L’expression d’ENO2 est enrichie dans les neurones et les cellules neuroendocrines et est fréquemment utilisée pour étudier le couplage métabolique, les états de différenciation cellulaire et les réponses au stress qui remodèlent la glycolyse. Des altérations de l’abondance d’ENO2 et de la régulation de ses isoformes ont été associées à des processus neurodégénératifs, à des lésions neuronales et à la biologie des tumeurs neuroendocrines, reflétant des changements de la demande métabolique et de la composition en types cellulaires. L’édition génomique d’ENO2 permet d’interroger de manière mécanistique le contrôle de la glycolyse, l’identité de la lignée neuronale et la reprogrammation métabolique à l’aide de modèles neuronaux, d’organoïdes cérébraux et de systèmes de cellules neuroendocrines.

Les particules d'activation lentivirales γ Enolase (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ENO2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales γ Enolase (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ENO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de γ Enolase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ENO2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.