γENaC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402577-ACT

SCNN1Gは、上皮性ナトリウムチャネル（ENaC）のγサブユニット（γENaC）をコードする。γENaCは、腎臓、肺、大腸などの上皮において、頂端膜を介した電気原性のNa⁺流入を担う、アミロライド感受性のヘテロ三量体チャネルである。γENaCの機能はアルドステロンおよびバソプレシンのシグナル伝達と統合され、上皮を横断する塩および水の輸送を制御することで、細胞外液量、気道表面液の恒常性、全身の電解質バランスに影響を与える。チャネル活性は、タンパク質分解的プロセシング、NEDD4-2を介したユビキチン依存的トラフィッキング、ならびに膜局在時間や開口確率を制御する細胞内経路によって調節される。SCNN1Gを含むENaCサブユニットの調節異常は、塩取り扱いおよび気道の水分維持に関わる疾患に関与するとされ、上皮生理学およびイオン輸送生物学における機構研究を支持する。

γENaC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCNN1Gの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γENaC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCNN1G 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCNN1G転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γENaCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCNN1G遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγENaC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCNN1G発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγENaC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。