γE-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419832
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- γE-crystallin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico γE-crystallin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
γE-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419832 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Cryge codifica a γE-cristalina, uma proteína estrutural das células das fibras do cristalino pertencente à superfamília das β/γ-cristalinas, que contribui para o índice de refração excepcionalmente alto e para a transparência de longo prazo do cristalino ocular. A γE-cristalina participa do processo rigidamente regulado de diferenciação e maturação das células das fibras do cristalino, no qual o empacotamento das cristalinas, a estabilidade proteica e a resistência à agregação são centrais para a proteostase. A ruptura da homeostase das cristalinas pode favorecer agregados que dispersam a luz e comprometer a biomecânica do cristalino, relacionando alterações em genes de cristalinas a fenótipos associados à catarata e a mecanismos correlatos de opacificação do cristalino. Em modelos murinos, Cryge é estudado para compreender a organização da rede de cristalinas, modificações pós-traducionais e respostas ao estresse que influenciam a clareza do cristalino ao longo do tempo.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO γE-crystallin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cryge em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cryge, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cryge na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína γE-crystallin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cryge para a investigação da sinalização de γE-crystallin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cryge críticos para a função γE-crystallin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cryge para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo γE-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo γE-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cryge. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo γE-crystallin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR γE-crystallin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cryge para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cryge definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.