Plásmido Doble Nickase (m) γ-catenin: sc-421210-NIC

Jup codifica la γ-catenina (plakoglobina), una proteína con repeticiones armadillo que conecta las uniones adherentes basadas en cadherinas y los desmosomas con el citoesqueleto, sosteniendo la integridad del tejido epitelial y cardíaco en el ratón. Participa en el ensamblaje de uniones, la mecanotransducción y la comunicación cruzada con la señalización Wnt/β-catenina mediante la competencia por socios de unión como TCF/LEF y los complejos de cadherinas. La alteración de la función o la localización de la γ-catenina se asocia con una adhesión célula–célula deteriorada, una diferenciación aberrante y cambios en la señalización que influyen en la remodelación tisular. Estudios in vivo y en sistemas celulares vinculan Jup con fenotipos similares a miocardiopatía y defectos de la barrera epitelial, lo que lo convierte en un nodo útil para investigar la biología de las uniones y la integración de señales.

γ-catenin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Jup en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Jup. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Jup. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Jup alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.