γ-catenin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421210

概要

Jup は、アーマジロ（armadillo）ファミリーに属するタンパク質である γ-カテニン（プラコグロビン）をコードしており、接着結合（adherens junction）やデスモソームにおいて、カドヘリンを細胞骨格へ連結して細胞間接着を安定化させる働きを担います。マウス組織では、γ-カテニンは上皮および心臓組織の完全性を支えるほか、発生過程や創傷応答における接着構造のリモデリングにも関与します。また、TCF/LEF 複合体との相互作用を介して Wnt/β-カテニン関連の転写プログラムに影響を及ぼすことがあり、接着状態と遺伝子発現制御を結び付けます。γ-カテニンやデスモソーム構造の異常は、バリア機能の変化、炎症、心筋症に関連する表現型と関連づけられており、Jup は接着構造を介したシグナル伝達や組織恒常性を研究するうえで有用な標的（ノード）となります。

γ-catenin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるJup遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Jup内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Jupのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γ-cateninタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γ-cateninシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Jup欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γ-cateninの機能に不可欠なJupエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Jupゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γ-catenin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγ-catenin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Jup遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γ-catenin HDRプラスミド（m）および γ-catenin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはJupホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のJup標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。