Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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γ-catenin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421210
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- γ-catenin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico γ-catenin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: γ-catenin Antibody (A-6): sc-514115
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
γ-catenin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421210 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Jup codifica la γ-catenina (plakoglobina), una proteina della famiglia armadillo che agisce nelle giunzioni aderenti e nei desmosomi per collegare le caderine al citoscheletro e stabilizzare l’adesione cellula-cellula. Nei tessuti murini, la γ-catenina sostiene l’integrità dei tessuti epiteliale e cardiaco e partecipa al rimodellamento delle giunzioni durante lo sviluppo e in risposta alle ferite. Può inoltre influenzare i programmi trascrizionali correlati a Wnt/β-catenina tramite interazioni con i complessi TCF/LEF, collegando lo stato adesivo alla regolazione genica. La deregolazione della γ-catenina o dell’architettura desmosomiale è associata ad alterazioni della funzione di barriera, infiammazione e fenotipi legati alla cardiomiopatia, rendendo Jup un nodo utile per studiare la segnalazione giunzionale e l’omeostasi tissutale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO γ-catenin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Jup in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Jup insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Jup a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina γ-catenin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Jup per lo studio della segnalazione di γ-catenin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Jup critici per la funzione di γ-catenin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Jup per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal γ-catenin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal γ-catenin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Jup. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal γ-catenin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR γ-catenin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Jup per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Jup definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.