Plásmido Doble Nickase (h) γC-crystallin: sc-402940-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)γC-crystallin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa γC-crystallin (h) y el plásmido de doble nickasa γC-crystallin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CRYGC. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) γC-crystallin | sc-402940-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) γC-crystallin | sc-402940-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El CRYGC humano codifica la γC-cristalina, una proteína estructural muy abundante en el cristalino ocular que contribuye al índice de refracción, la transparencia y la estabilidad a largo plazo de las células fibra. Como miembro de la superfamilia de las β/γ-cristalinas, la γC-cristalina favorece el empaquetamiento estrecho de proteínas y la resistencia a la agregación, procesos centrales para la proteostasis en el entorno de las células fibra del cristalino, prácticamente carente de orgánulos. Las alteraciones en el plegamiento y la solubilidad de las cristalinas se relacionan con las respuestas al estrés oxidativo y con el mantenimiento de las proteínas del cristalino dependiente de chaperonas, vinculando la homeostasis alterada con agregados que dispersan la luz. La variación genética o la estabilidad desregulada de la γC-cristalina se asocia con fenotipos hereditarios de opacidad del cristalino, lo que proporciona un punto de entrada molecular para estudiar mecanismos relevantes para la catarata.
γC-crystallin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRYGC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRYGC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRYGC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRYGC alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.