γC-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402940

概要

CRYGCはヒトγC-クリスタリンをコードしており、γC-クリスタリンは眼球水晶体に非常に豊富に存在する構造タンパク質です。高密度に詰まった可溶性タンパク質複合体を維持することで、水晶体の透明性と屈折特性に寄与します。γ-クリスタリンファミリーの一員として、タンパク質の入れ替わり（ターンオーバー）機構を欠く終末分化した水晶体線維細胞において、長期的なタンパク質安定性を支えています。クリスタリンの恒常性が破綻するとタンパク質のミスフォールディングや凝集が促進され、これは水晶体の透明性低下と関連する過程です。CRYGCの遺伝的変異や発現変化は遺伝性白内障の表現型と関連づけられており、プロテオスタシスや水晶体発生を研究するうえで有用な標的となっています。

γC-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCRYGC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CRYGC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CRYGCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γC-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γC-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CRYGC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γC-crystallinの機能に不可欠なCRYGCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CRYGCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γC-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびγC-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CRYGC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γC-crystallin HDRプラスミド（h）および γC-crystallin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCRYGCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCRYGC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。