δENaC Double Nickase Plasmid (h): sc-404577-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das δENaC Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- δENaC Double-Nickase-Plasmid (h) und δENaC Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SCNN1D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
δENaC Double Nickase Plasmid (h) | sc-404577-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
δENaC Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404577-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCNN1D kodiert die Delta-Untereinheit des epithelialen Natriumkanals (δENaC), eines nicht spannungsabhängigen, amiloridempfindlichen Na⁺-Kanals, der zur transepithelialen Natriumresorption und zur Regulation des Membranpotenzials beiträgt. δENaC kann sich mit anderen ENaC-Untereinheiten zusammenlagern und dadurch das Gating und die Ionenselektivität des Kanals beeinflussen, was die Elektrolyt- und Flüssigkeitshomöostase in epithelialen Geweben unterstützt. Die ENaC-Aktivität wird durch proteolytische Prozessierung, Ubiquitinierung durch NEDD4L sowie durch Signalwege reguliert, die Kanal-Trafficking und Öffnungswahrscheinlichkeit beeinflussen, wodurch SCNN1D mit Mechanismen der epithelialen Transportkontrolle verknüpft ist. Eine veränderte ENaC-Funktion wird mit Störungen des Salz- und Flüssigkeitshaushalts in Verbindung gebracht und wurde unter anderem im Kontext der Hydratation der Atemwegsoberfläche sowie blutdruckbezogener Phänotypen untersucht.
δENaC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SCNN1D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SCNN1D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SCNN1D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SCNN1D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.