β-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423332

概要

Tectb はβ-テクトリンをコードしており、β-テクトリンは分泌性糖タンパク質として内耳の蓋膜（テクトリアルメンブレン）の細胞外マトリックス構築に寄与し、蝸牛の力学に重要な超分子複合体の組織化を助けます。蓋膜と有毛細胞のステレオシリア間の生体力学的カップリングを形作ることで、β-テクトリンは効率的な機械電気変換と音刺激に誘発されるシグナル伝達を支えます。β-テクトリン関連ネットワークを含む蓋膜マトリックス成分の破綻は、聴覚閾値の変化や感音性難聴の表現型と関連しており、Tectb はマトリックス依存的な感覚機能制御を研究するうえで有用な遺伝子座です。マウスモデルでは、Tectb の改変により、細胞外マトリックスの組み立て、上皮性分泌、ならびに聴覚処理の基盤となる構造—機能関係の解析が可能になります。

β-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTectb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tectb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tectbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β-tectorinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β-tectorinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tectb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β-tectorinの機能に不可欠なTectbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tectbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβ-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tectb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β-tectorin HDRプラスミド（m）および β-tectorin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTectbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTectb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。