β-FR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403346

概要

FOLR2は、葉酸に結合してその取り込みを仲介する細胞表面受容体であるβ-葉酸受容体（β-FR）をコードしている。β-FRはグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型受容体であり、1炭素代謝およびヌクレオチド生合成を支える。細胞内の葉酸利用可能性を調節することで、β-FRはDNA合成や、増殖・分化プログラムと交差するメチル化依存的プロセスに影響を及ぼす。ヒトでは、FOLR2は特定の骨髄系細胞およびマクロファージのサブポピュレーションのマーカーとしてしばしば用いられ、葉酸依存性代謝や免疫細胞状態が再編される状況で研究されている。FOLR2発現パターンの変化は、炎症性微小環境や疾患に関連する免疫リモデリングと関連しており、初代細胞やモデル系における機構研究の動機となっている。

β-FR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFOLR2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FOLR2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FOLR2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β-FRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β-FRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FOLR2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β-FRの機能に不可欠なFOLR2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FOLR2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β-FR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ-FR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FOLR2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β-FR HDRプラスミド（h）および β-FR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFOLR2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFOLR2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。