β-defensin 3 Double Nickase Plasmid (h): sc-416934-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-defensin 3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-defensin 3 Double-Nickase-Plasmid (h) und β-defensin 3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DEFB103B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β-defensin 3: sc-59495
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-defensin 3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-defensin 3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes DEFB103B kodiert β-Defensin 3, ein kationisches antimikrobielles Peptid, das zur Immunität der epithelialen Barriere beiträgt, indem es mikrobielle Membranen direkt zerstört und die Signalübertragung der angeborenen Immunantwort moduliert. β-Defensin 3 wird durch entzündliche Reize induziert und ist an chemotaktischen und immunregulatorischen Prozessen beteiligt, die die Rekrutierung von Leukozyten und die Homöostase der Schleimhaut prägen, mit Verbindungen zu NF-κB-assoziierten Programmen der Wirtsabwehr. Eine veränderte Defensin-Expression wurde mit einer erhöhten Anfälligkeit für Haut- und Atemwegsentzündungen, dysbiosebedingten Phänotypen und einem erhöhten Infektionsrisiko in Verbindung gebracht, was DEFB103B zu einem nützlichen Locus für die Untersuchung der Regulation antimikrobieller Peptide in krankheitsrelevanten epithelialen Kontexten macht.
β-defensin 3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DEFB103B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DEFB103B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DEFB103B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DEFB103B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.