β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401438

概要

TUBB8はβ8チューブリンをコードしており、β8チューブリンはαチューブリンと重合して微小管を形成するβチューブリンのアイソタイプです。微小管は、細胞骨格の構築、細胞内輸送、ならびに細胞分裂時の紡錘体動態を支えます。微小管の再編成は、有糸分裂、オルガネラの配置、細胞極性といった過程の基盤であり、微小管関連タンパク質による協調的な制御や、チューブリンの翻訳後修飾によって調節されます。チューブリンのアイソタイプ組成が変化すると、微小管の安定性や微小管を標的とするストレスに対する感受性が変わり得て、染色体分配の異常や細胞恒常性の破綻といった不具合に結びつきます。TUBB8は、微小管の組織化が重要となる生殖・発生関連の表現型の文脈で研究されており、アイソタイプ特異的な微小管機能への寄与を解明するためのモデルとなっています。

β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBB8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBB8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBB8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β8 Tubulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β8 Tubulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBB8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β8 Tubulinの機能に不可欠なTUBB8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBB8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ8 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBB8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β8 Tubulin HDRプラスミド（h）および β8 Tubulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBB8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBB8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。