Plasmide CRISPR/Cas9 KO β6 Tubulin (h): sc-400062

Présentation

TUBB6 code la β6-tubuline humaine, un isotype de la β-tubuline qui forme un hétérodimère avec l’α-tubuline pour constituer les microtubules, soutenant l’architecture du cytosquelette et le transport intracellulaire. La dynamique des microtubules, gouvernée par la composition en isotypes de tubuline, régule l’assemblage du fuseau mitotique, la ségrégation des chromosomes et la progression du cycle cellulaire, et façonne également la polarité et la motilité cellulaires. La β6-tubuline participe à des voies contrôlant le trafic vésiculaire et le positionnement des organites via des interactions avec des protéines associées aux microtubules et des complexes moteurs. La dérégulation des réseaux de tubuline et du comportement des microtubules est associée à des phénotypes prolifératifs, à l’instabilité chromosomique et à des programmes de migration altérés, pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles liés au cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β6 Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBB6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBB6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBB6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β6 Tubulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBB6 pour l'étude de la signalisation de β6 Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBB6 essentiels à la fonction de β6 Tubulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBB6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β6 Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β6 Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBB6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β6 Tubulin plasmide HDR (h) et le β6 Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBB6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBB6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.