β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400058

概要

TUBB4A はβ4チューブリンをコードしており、β4チューブリンは神経細胞で高発現するβチューブリンのアイソタイプの一つで、αチューブリンと重合して微小管を形成し、有糸分裂紡錘体の構築、細胞内輸送、神経突起の伸長を支えます。微小管の動的なターンオーバーは、軸索内輸送や細胞骨格リモデリングなどの過程を基盤から担い、細胞周期の進行と神経分化を協調させる経路とも統合されています。TUBB4A の機能が変化すると微小管の組み立てや安定性が損なわれ、遺伝学的研究では本遺伝子が神経発達性および神経変性の表現型と関連することが示されています。細胞骨格の中核成分として、β4チューブリンは、微小管依存的シグナル伝達や細胞骨格ストレスに対する脆弱性をヒト細胞モデルで検討するための機序的な手がかりを提供します。

β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBB4A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBB4A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBB4Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β4 Tubulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β4 Tubulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBB4A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β4 Tubulinの機能に不可欠なTUBB4Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBB4Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ4 Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBB4A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β4 Tubulin HDRプラスミド（h）および β4 Tubulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBB4Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBB4A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。