Plásmido Doble Nickase (h) β3 Tubulin: sc-400525-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)β3 Tubulin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa β3 Tubulin (h) y el plásmido de doble nickasa β3 Tubulin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TUBB3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: β3 Tubulin Anticuerpo (2G10): sc-80005
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) β3 Tubulin | sc-400525-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) β3 Tubulin | sc-400525-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB3 codifica la β3-tubulina humana, un isotipo de β-tubulina enriquecido en neuronas que polimeriza con la α-tubulina para formar microtúbulos, sosteniendo la dinámica del huso mitótico, el crecimiento axonal, el transporte intracelular y la remodelación del citoesqueleto. La β3-tubulina participa en procesos dependientes de microtúbulos que determinan la polaridad y la migración celular e influye en el tráfico de vesículas mediante interacciones con proteínas motoras. La alteración de la expresión de TUBB3 o de la composición de isotipos de tubulina se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y a la biología del cáncer, donde la regulación de la red de microtúbulos se cruza con vías de proliferación, invasión y respuesta a fármacos. Como marcador de diferenciación neuronal y del estado del citoesqueleto, TUBB3 se estudia ampliamente en modelos de compromiso de linaje neural y de plasticidad de células tumorales.
β3 Tubulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TUBB3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TUBB3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TUBB3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TUBB3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.