β2C Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400056

概要

TUBB4Bはβ2Cチューブリンをコードしており、これは微小管へと重合して細胞骨格構造の維持、細胞内輸送、有糸分裂紡錘体の組み立てを支えるα/β-チューブリンヘテロ二量体の中核成分です。微小管の動的な再編成は、細胞周期の進行、オルガネラの配置、繊毛形成などの過程を支え、極性制御やストレス応答を司る経路とも連携します。チューブリンのアイソタイプバランスや微小管動態の変化は、多様な疾患文脈において、増殖性の表現型、染色体不安定性、移動能の変化としばしば関連づけられています。微小管依存的な生物学における構造的・制御的ハブとして、β2Cチューブリンは、細胞分裂やトラフィッキングに対する細胞骨格制御を解析するうえで有用な標的です。

β2C Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBB4B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBB4B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBB4Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β2C Tubulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β2C Tubulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBB4B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β2C Tubulinの機能に不可欠なTUBB4Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBB4Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β2C Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ2C Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBB4B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β2C Tubulin HDRプラスミド（h）および β2C Tubulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBB4Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBB4B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。