β2B Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400059

Panoramica

TUBB2B codifica la β2B-tubulina, un’isotipo di β-tubulina arricchito nei neuroni che forma eterodimeri con l’α-tubulina per assemblare i microtubuli e sostenere l’integrità del citoscheletro. La dinamica dei microtubuli guidata dai polimeri di tubulina regola l’organizzazione del fuso mitotico, il traffico intracellulare, la crescita dei neuriti e la migrazione neuronale, collegando TUBB2B a processi fondamentali come la divisione cellulare e il neurosviluppo. In quanto componente del citoscheletro dei microtubuli, la β2B-tubulina interagisce con vie che controllano il trasporto assonale e la stratificazione corticale attraverso interazioni con proteine associate ai microtubuli e complessi motori. Varianti patogene in TUBB2B sono state associate a tubulinopatie e malformazioni dello sviluppo corticale, offrendo un punto d’ingresso genetico per studiare i meccanismi citoscheletrici alla base di fenotipi neurosviluppativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β2B Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBB2B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBB2B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBB2B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β2B Tubulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBB2B per lo studio della segnalazione di β2B Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUBB2B critici per la funzione di β2B Tubulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBB2B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β2B Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β2B Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBB2B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β2B Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β2B Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBB2B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBB2B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.