Plásmido CRISPR de Activación (m) β-2-Microglobulin: sc-419281-ACT

B2m codifica la β‑2‑microglobulina, un componente conservado de los complejos del MHC de clase I, necesario para el plegamiento correcto, la estabilidad en la superficie y la presentación de péptidos a los linfocitos T CD8+. En células de ratón, la β‑2‑microglobulina respalda las vías de procesamiento y presentación de antígenos que coordinan la vigilancia inmunitaria, los programas génicos sensibles al interferón y los mecanismos de tolerancia. Las alteraciones en la expresión o la función de B2m se utilizan ampliamente como modelo de cambios en la presentación de MHC I que influyen en el reconocimiento inmunitario, la inflamación y las interacciones huésped–patógeno. Como componente inmunitario constitutivo, también es relevante para estudios de biología de trasplantes, interacciones tumor–sistema inmunitario y flujos de trabajo de ingeniería celular en los que la modulación del MHC I afecta la compatibilidad inmunitaria.

β-2-Microglobulin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B2m sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-2-Microglobulin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B2m en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B2m, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-2-Microglobulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B2m y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-2-Microglobulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-2-Microglobulin en células tumorales con expresión de B2m silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.