β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-428053

概要

Ap2b1 は、マウス細胞におけるクラスリン介在性エンドサイトーシスの中核要素である AP-2 アダプター複合体の β2-アダプチン（β2-adaptin）サブユニットをコードします。β2-アダプチンは、細胞膜でのカーゴ選択とクラスリン被覆の組み立てを結び付け、受容体、トランスポーター、シグナル伝達複合体の内在化およびリサイクリングを協調的に制御します。これらの機能を通じて AP-2 は、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達、シナプス小胞サイクリング、細胞骨格ダイナミクスなど、膜輸送に依存する経路に影響を及ぼします。AP-2 を介したトラフィッキングの破綻は、受容体のターンオーバーやエンドソームでのソーティングの変化によって細胞状態の応答が再構成され得ることから、神経生物学、代謝、腫瘍性シグナル伝達ネットワークの研究に広く関係します。

β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAp2b1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ap2b1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ap2b1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β2-Adaptinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β2-Adaptinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ap2b1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β2-Adaptinの機能に不可欠なAp2b1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ap2b1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβ2-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ap2b1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β2-Adaptin HDRプラスミド（m）および β2-Adaptin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAp2b1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAp2b1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。