Plásmido CRISPR de Activación (h) β-1,4-Gal-T1: sc-403299-ACT

B4GALT1 codifica la β-1,4-Gal-T1 humana, una β1,4-galactosiltransferasa residente del aparato de Golgi que transfiere galactosa a N-acetilglucosamina para generar motivos de N-acetillactosamina en glicanos N- y O-ligados y en glicoesfingolípidos. Esta actividad es fundamental para la ramificación y maduración de los glicanos dentro de la vía secretora, e influye en el plegamiento de proteínas, su tráfico y la presentación de glicanos en la superficie celular. Al moldear interacciones dependientes de la glicosilación, la β-1,4-Gal-T1 afecta la adhesión celular, la señalización de receptores y los procesos de reconocimiento inmunitario. La glicosilación alterada vinculada a B4GALT1 se ha asociado con cambios en la función de glicoproteínas y con fenotipos relevantes para enfermedad en contextos de investigación sobre inflamación, biología del cáncer y trastornos congénitos de la glicosilación.

β-1,4-Gal-T1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B4GALT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-1,4-Gal-T1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B4GALT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B4GALT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-1,4-Gal-T1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B4GALT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-1,4-Gal-T1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-1,4-Gal-T1 en células tumorales con expresión de B4GALT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.