Plasmide CRISPR d'Activation (h) α-taxilin: sc-404316-ACT

Le gène humain **TXLNA** code l’**α-taxiline**, une protéine cytosolique qui s’associe aux **syntaxines** et à d’autres composants de la machinerie **SNARE** afin de soutenir le trafic vésiculaire et l’exocytose régulée. Par ses interactions avec les facteurs de fusion membranaire, l’α-taxiline contribue à des processus de transport intracellulaire qui influencent la sécrétion, l’acheminement des protéines membranaires et la dynamique des signaux. Une expression altérée de **TXLNA** a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui motive des études sur la façon dont le transport vésiculaire et les voies liées aux SNARE s’articulent avec les réponses au stress cellulaire et le contrôle de la croissance. Ces caractéristiques font de **TXLNA** une cible utile pour étudier la régulation, dépendante du trafic, de l’état cellulaire et de phénotypes pertinents pour les maladies.

α-taxilin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TXLNA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α-taxilin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TXLNA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TXLNA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α-taxilin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TXLNA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α-taxilin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α-taxilin dans les cellules tumorales présentant une expression de TXLNA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.