α_2A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419023

概要

Adra2a はマウスの α2A-AR（Gi/Go 共役型のアドレナリン受容体）をコードしており、ノルエピネフリンおよびエピネフリンに応答してアデニル酸シクラーゼを抑制し、細胞内 cAMP を低下させます。GPCR シグナル伝達を介して、α2A-AR はイオンチャネル活性、シナプス前終末での神経伝達物質放出、ならびにシナプス伝達と神経細胞の興奮性を規定する PKA 依存的なリン酸化プログラムを調節します。末梢組織では、α2A-AR は交感神経トーンの調節や、カテコールアミンによって制御される細胞応答の調整に寄与します。ADRA2A を含むアドレナリン作動性シグナルの破綻は、神経行動学的表現型や心代謝形質との関連が報告されており、本受容体はストレス軸の調節や自律神経生理を研究する上で重要です。

α2A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdra2a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adra2a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adra2aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α2A-ARタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α2A-ARシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adra2a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α2A-ARの機能に不可欠なAdra2aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adra2aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α2A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα2A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adra2a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α2A-AR HDRプラスミド（m）および α2A-AR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdra2aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdra2a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。