α1B-AR Double Nickase Plasmid (m): sc-419020-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α1B-AR Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α1B-AR Double-Nickase-Plasmid (m) und α1B-AR Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Adra1b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α1B-AR Double Nickase Plasmid (m) | sc-419020-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1B-AR Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419020-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Adra1b kodiert den murinen α1B-Adrenozeptor (α1B-AR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor für Katecholamine, der hauptsächlich an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase Cβ aktiviert. Dies steigert die IP3/DAG-Signalübertragung, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ sowie die Aktivität der Proteinkinase C. Über diese Signalwege reguliert er den Tonus der glatten Gefäßmuskulatur, die kardiale und neuronale Erregbarkeit und die Modulation der Neurotransmitterfreisetzung und integriert sympathische Inputs mit MAPK/ERK- und anderen Kinasekaskaden. Die α1B-AR-Signalgebung beeinflusst zudem Transkriptionsprogramme, die mit Zellwachstum und Stressantworten verknüpft sind, und eine veränderte adrenerge Rezeptorfunktion wurde mit Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die für Hypertonie, kardiales Remodeling und die neurobehaviorale Regulation relevant sind. Mausmodelle für Adra1b unterstützen daher mechanistische Studien der adrenergen Signalübertragung in kardiovaskulären und nervalen Kontexten.
α1B-AR Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Adra1b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Adra1b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Adra1b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Adra1b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.