Plásmido Doble Nickase (h) α1B-AR: sc-403295-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)α1B-AR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa α1B-AR (h) y el plásmido de doble nickasa α1B-AR (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ADRA1B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) α1B-AR | sc-403295-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) α1B-AR | sc-403295-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADRA1B codifica el receptor adrenérgico humano α1B (α1B-AR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla de forma preferente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, la producción de fosfatos de inositol, la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C. A través de estas vías, el α1B-AR influye en el tono del músculo liso vascular, la neurotransmisión y una regulación simpática más amplia de la excitabilidad y la contractilidad celulares, con activación posterior de MAPK/ERK y otras redes de señalización sensibles al estrés. La alteración de la señalización de los receptores adrenérgicos se ha implicado en la biología cardiovascular y neuropsiquiátrica, lo que convierte a ADRA1B en un locus útil para estudios mecanísticos de la señalización de GPCR, la desensibilización/internalización del receptor y las respuestas sesgadas por vía en modelos celulares relevantes.
α1B-AR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADRA1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADRA1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADRA1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADRA1B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.