α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422904
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してα-sarcoglycanゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: α-sarcoglycan 抗体 (D-7): sc-271321
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-422904 | 20 µg | $397.00 |
概要
Sgca はα-サルコグリカンをコードしており、α-サルコグリカンはサルコグリカン複合体の中核を成す膜貫通成分として、サルコレマを安定化し、骨格筋および心筋における力の伝達を支えるジストロフィン–糖タンパク質複合体（dystrophin–glycoprotein complex）の一部を構成する。α-サルコグリカンは細胞外マトリックスと細胞骨格を連結することで、収縮時の膜の完全性とメカノトランスダクションに寄与し、収縮に伴う損傷から筋線維を保護する。Sgca の破綻は、ジストロフィン関連タンパク質複合体の組み立てを乱し、筋線維の安定性を損なうため、モデル系における筋ジストロフィー様表現型の分子基盤となる。したがってマウス Sgca は、サルコレマの接着シグナル、筋の変性／再生プログラム、ならびに下流の炎症性・線維化リモデリング経路を研究するうえで重要な標的である。
α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSgca遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sgca内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sgcaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-sarcoglycanタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、α-sarcoglycanシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sgca欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- α-sarcoglycanの機能に不可欠なSgcaエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Sgcaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sgca遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
α-sarcoglycan HDRプラスミド（m）および α-sarcoglycan HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSgcaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSgca標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。