α-gal A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-419046-KO-2

概要

Gla はマウスの α-ガラクトシダーゼA（α-gal A）をコードしており、これはリソソームのエキソグリコシダーゼとして、糖脂質（グリコスフィンゴ脂質）や関連する糖鎖複合体の末端 α-ガラクトシル残基を除去します。この活性は、グリコスフィンゴ脂質分解経路を介してリソソームでの異化代謝と膜脂質恒常性を支え、リソソーム機能をオートファジーやエンドリソソーム輸送といった細胞の品質管理プロセスと結び付けます。α-gal A 機能の破綻は、古典的には糖脂質の蓄積とリソソーム病（リソソーム蓄積症）様の表現型と関連しており、Gla は代謝ストレス応答やオルガネラ機能不全を研究するうえで重要な標的となります。マウスモデルでは、Gla の攪乱を用いて、脂質代謝回転の変化が炎症、シグナル伝達、ならびに細胞種特異的なリソソーム負荷への感受性にどのように影響するかを検証できます。

α-gal A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるGla遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gla内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Glaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-gal Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-gal Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gla欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-gal Aの機能に不可欠なGlaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Glaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-gal A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα-gal A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gla遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-gal A HDRプラスミド（m）および α-gal A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGlaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGla標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。