α Enolase Lentiviral Activation Particles (m): sc-420178-LAC

Eno1 kodiert die murine α-Enolase, ein glykolytisches Enzym, das die Umwandlung von 2-Phosphoglycerat zu Phosphoenolpyruvat katalysiert und zur Aufrechterhaltung der zellulären ATP-Produktion sowie der metabolischen Flexibilität beiträgt. Über die Glykolyse hinaus wird α-Enolase mit der Organisation des Zytoskeletts und Stressantworten in Verbindung gebracht und verknüpft damit den metabolischen Zustand mit Prozessen wie Zellwachstum, Überleben und migrationsbezogenen Abläufen. Veränderte Aktivität und Expression von ENO1/α-Enolase werden häufig im Kontext metabolischer Reprogrammierung, Hypoxie und entzündlicher Mikroumgebungen untersucht, in denen Verschiebungen des glykolytischen Flusses Signal- und Transkriptionsprogramme beeinflussen können. Als breit exprimierter metabolischer Knotenpunkt mit hohem Durchsatz ist Eno1 ein nützlicher Ansatzpunkt, um die Kopplung von Energiestoffwechsel und krankheitsrelevanten Phänotypen in diversen murinen Zellmodellen zu untersuchen.

α Enolase Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Eno1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

α Enolase Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Eno1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen α Enolase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Eno1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.