α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418972

概要

Actn3はα-アクチニン-3をコードしており、α-アクチニン-3はサルコメアのアクチン結合タンパク質で、速筋（速筋線維）のZディスクに豊富に存在し、収縮時に細いフィラメントを架橋して安定化させます。収縮装置を組織化し、サルコメアの力学特性に寄与することで、α-アクチニン-3は筋パフォーマンス形質や、解糖系代謝および機械的負荷応答に関連する筋線維タイプの性質に影響を与えます。α-アクチニン-3機能の喪失は、筋力や持久力の表現型の変化と関連し、ミオパチー、筋萎縮、運動や不活動への適応といった文脈で研究されています。マウスモデルでは、Actn3は筋原線維の構造ネットワークや、収縮性、筋リモデリング、ストレス応答を制御する経路を解析するための扱いやすい研究系を提供します。

α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるActn3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Actn3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Actn3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-actinin-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-actinin-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Actn3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-actinin-3の機能に不可欠なActn3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Actn3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα-actinin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Actn3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-actinin-3 HDRプラスミド（m）および α-actinin-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはActn3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のActn3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。