α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401186

概要

ACTN2は、Ca2+によって調節されるアクチン結合タンパク質であるα-アクチニン-2をコードしており、フィラメント状アクチンを架橋するとともに、細胞骨格ネットワークを接着構造や収縮構造へと固定します。横紋筋では、α-アクチニン-2はZディスクの中核構成要素としてサルコメアの構築を組織化し、アクチン、チチン関連複合体、その他の足場タンパク質との相互作用を介して力の伝達を支えます。構造的役割にとどまらず、ACTN2はメカノトランスダクションや細胞骨格リモデリング経路にも関与し、細胞張力、コスタメアでのシグナル伝達、筋原線維の組み立てに影響を及ぼします。ACTN2の遺伝子破綻やバリアントは心筋症様の表現型や筋機能の変化と関連づけられており、サルコメアの完全性やストレス応答性シグナル伝達を研究する上で重要です。

α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるACTN2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ACTN2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ACTN2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-actinin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-actinin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ACTN2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-actinin-2の機能に不可欠なACTN2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ACTN2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびα-actinin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ACTN2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-actinin-2 HDRプラスミド（h）および α-actinin-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはACTN2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のACTN2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。