Zyxin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402295-ACT

Das menschliche Gen **ZYX** kodiert **Zyxin**, ein LIM-Domänen-Scaffold in Fokalkontakten, das den Umbau des Aktinzytoskeletts und die Mechanotransduktion an Stellen integrinvermittelter Adhäsion koordiniert. Zyxin interagiert mit VASP/EVL und α-Actinin, um die Aufrechterhaltung von Stressfasern, das Zell-Spreading und die gerichtete Migration zu unterstützen, und verknüpft Signale aus der extrazellulären Matrix mit Rho-GTPase-regulierter Kontraktilität sowie YAP/TAZ-abhängigen Programmen. Durch sein Shuttling zwischen Adhäsionskomplexen und dem Zellkern kann Zyxin transkriptionelle Antworten auf mechanischen Stress und Störungen des Zytoskeletts beeinflussen. Eine fehlregulierte ZYX-Expression oder -Lokalisation wurde in krebsbezogenen Modellen mit veränderter Adhäsionssignalgebung und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht; darüber hinaus spielt Zyxin auch allgemein bei Gewebeumbauprozessen eine Rolle, bei denen Zell-Matrix-Dynamiken entscheidend sind.

Zyxin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZYX-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Zyxin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZYX-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZYX-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Zyxin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZYX-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Zyxin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Zyxin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZYX-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.