Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZSWIM8 (h): sc-411661

Présentation

ZSWIM8 (zinc finger SWIM-type containing 8) code un composant d’une ligase E3 de l’ubiquitine, qui agit comme adaptateur de substrat au sein d’un complexe d’ubiquitination de type Cullin-RING, contribuant à contrôler le renouvellement des protéines dans le noyau et le cytoplasme. Un rôle clé de ZSWIM8 concerne le contrôle qualité des petits ARN : il favorise la dégradation des microARN dirigée par la cible (TDMD, *target-directed microRNA degradation*) afin d’ajuster l’abondance des miARN et, en aval, la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique. Par ces mécanismes, ZSWIM8 influence des voies associées aux transitions d’état cellulaire, aux programmes développementaux et aux réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Des dérèglements de la protéostasie médiée par l’ubiquitine et de l’homéostasie des miARN liés à une activité altérée de ZSWIM8 ont été étudiés dans des contextes pertinents pour la biologie du cancer et des phénotypes neurodéveloppementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZSWIM8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZSWIM8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZSWIM8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZSWIM8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZSWIM8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZSWIM8 pour l'étude de la signalisation de ZSWIM8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZSWIM8 essentiels à la fonction de ZSWIM8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZSWIM8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZSWIM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZSWIM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZSWIM8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZSWIM8 plasmide HDR (h) et le ZSWIM8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZSWIM8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZSWIM8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.