ZSWIM8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411661

Panoramica

ZSWIM8 (zinc finger SWIM-type containing 8) codifica un componente di una ligasi E3 dell’ubiquitina che funge da adattatore di substrato all’interno di un complesso di ubiquitinazione di tipo Cullin-RING, contribuendo a controllare il turnover proteico nel nucleo e nel citoplasma. Un ruolo chiave di ZSWIM8 riguarda il controllo qualità dei piccoli RNA, dove promuove la degradazione dei microRNA guidata dal bersaglio (TDMD) per modulare l’abbondanza di miRNA e la conseguente regolazione genica post-trascrizionale. Attraverso questi meccanismi, ZSWIM8 influenza vie associate a transizioni dello stato cellulare, programmi di sviluppo e reti trascrizionali responsivi allo stress. La deregolazione della proteostasi mediata dall’ubiquitina e dell’omeostasi dei miRNA associata a un’alterata attività di ZSWIM8 è stata studiata in contesti rilevanti per la biologia del cancro e per fenotipi neuro-sviluppativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZSWIM8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZSWIM8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZSWIM8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZSWIM8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZSWIM8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZSWIM8 per lo studio della segnalazione di ZSWIM8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZSWIM8 critici per la funzione di ZSWIM8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZSWIM8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZSWIM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZSWIM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZSWIM8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZSWIM8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZSWIM8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZSWIM8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZSWIM8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.