ZNRF3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418162

Descripción general

ZNRF3 (zinc and ring finger 3) codifica una ligasa E3 de ubiquitina transmembrana que actúa como regulador de retroalimentación negativa de la señalización Wnt/β-catenina al promover la ubiquitinación y el recambio (degradación/turnover) de los complejos receptores Frizzled y LRP5/6 en la superficie celular. A través de interacciones con las R-spondinas y los receptores LGR, ZNRF3 ayuda a calibrar la intensidad de la vía, influyendo en el mantenimiento de células madre, la homeostasis tisular y los programas de diferenciación. La disrupción de la regulación de receptores mediada por ZNRF3 puede potenciar la señalización Wnt y modificar las salidas transcripcionales que controlan la proliferación y el compromiso de linaje. Alteraciones genéticas y funcionales en ZNRF3 se han implicado en la biología de enfermedades dependientes de Wnt, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control de la vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZNRF3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ZNRF3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ZNRF3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ZNRF3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZNRF3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ZNRF3 para la investigación de la señalización de ZNRF3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ZNRF3 críticos para la función de ZNRF3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ZNRF3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ZNRF3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZNRF3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ZNRF3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZNRF3 (h) y el plásmido HDR ZNRF3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ZNRF3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ZNRF3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.