ZNF804A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403525-ACT

ZNF804A kodiert ein Zinkfingerprotein, das an der Transkriptionsregulation und an neuroentwicklungsbezogenen Genexpressionsprogrammen beteiligt ist. In menschlichen Zellen wurde ZNF804A mit Prozessen wie der neuronalen Differenzierung, der synaptischen Konnektivität und aktivitätsabhängigen Signalwegen in Verbindung gebracht, die die kortikale Verschaltung prägen. Genetische und Expressionsstudien bringen Varianten von ZNF804A mit einer erhöhten Anfälligkeit für neuropsychiatrische Phänotypen in Zusammenhang und stützen damit seine Nutzung als molekularen Ansatzpunkt zur Untersuchung risikorelevanter regulatorischer Netzwerke. Experimentell hilft die Modulation von ZNF804A dabei, nachgeschaltete Transkriptionsänderungen sowie relevante Signalweg-Interaktionen zu kartieren, die für die Gehirnentwicklung und neuronale Funktion bedeutsam sind.

ZNF804A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF804A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF804A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF804A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF804A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF804A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF804A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF804A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF804A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF804A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.