Plásmido CRISPR de Activación (h) ZNF649: sc-418512-ACT

ZNF649 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc tipo C2H2 implicado en la unión al ADN de manera específica de secuencia y en la regulación de programas de expresión génica que influyen en la identidad celular y en procesos asociados a la cromatina. Como proteína reguladora nuclear, ZNF649 suele considerarse dentro de redes más amplias vinculadas a dedos de zinc KRAB que modulan la dinámica de represión/activación transcripcional, lo que podría afectar la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las vías de respuesta al estrés. La regulación alterada de factores de transcripción con dedos de zinc se ha asociado con circuitos transcripcionales desregulados en el cáncer y en otras enfermedades caracterizadas por un control epigenético aberrante, lo que hace que ZNF649 sea relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis transcripcional. Investigar la actividad de ZNF649 puede ayudar a esclarecer cómo los eventos de unión asociados a promotores y potenciadores (enhancers) dan forma a la señalización posterior y a las redes reguladoras de genes en células humanas.

ZNF649 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF649 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZNF649 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF649 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF649, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZNF649. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF649 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZNF649 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZNF649 en células tumorales con expresión de ZNF649 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.