ZIP9 Plasmide Double Nickase (m): sc-435885-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZIP9 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZIP9 Double Nickase Plasmid (m) e il ZIP9 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc39a9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZIP9 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435885-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZIP9 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-435885-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc39a9 codifica ZIP9 (SLC39A9), un membro della famiglia ZIP dei trasportatori di ioni metallici, che contribuisce all’omeostasi dello zinco cellulare regolando l’ingresso dello zinco e la sua distribuzione tra compartimenti. Modulando la disponibilità intracellulare di Zn²⁺, ZIP9 influenza enzimi zinco-dipendenti e programmi trascrizionali, collegando l’equilibrio dei metalli a processi quali traffico di membrana, segnalazione e risposte allo stress. Un trasporto dello zinco deregolato è ampiamente associato ad alterazioni della funzione immunitaria, del controllo metabolico e della segnalazione proliferativa, rendendo Slc39a9 un bersaglio utile per studi meccanicistici su vie dipendenti dai metalli. Nei sistemi murini, la perturbazione di ZIP9 consente di analizzare le reti sensibili allo zinco e i loro fenotipi a valle in tipi cellulari e tessuti rilevanti.
ZIP9 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc39a9 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc39a9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc39a9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc39a9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.