ZIP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412062-ACT

SLC39A2 kodiert ZIP2, einen Zink‑Influx‑Transporter der Plasmamembran, der die Verfügbarkeit von zytosolischem Zn2+ reguliert und zinkabhängige enzymatische Aktivität, Proteinfaltung und transkriptionelle Kontrolle unterstützt. Indem ZIP2 die Zinkhomöostase mitprägt, beeinflusst es Prozesse wie epitheliale Differenzierung, Reaktionen auf oxidativen Stress und Signaltransduktionswege, die von zinksensitiven Regulatoren abhängen. Eine veränderte Zinktransportaktivität wurde mit gestörter Barrierefunktion und inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, wodurch die ZIP2‑Biologie mit Kontexten wie epithelialer Dysfunktion und krebsassoziierten Phänotypen verknüpft ist. Als Bestandteil des breiteren ZIP/SLC39‑Netzwerks stellt ZIP2 einen gut untersuchbaren Angriffspunkt dar, um zu analysieren, wie Zinkflüsse den Zellstoffwechsel und stressadaptive Programme modulieren.

ZIP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC39A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZIP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC39A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC39A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZIP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC39A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZIP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZIP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC39A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.