Plasmide CRISPR d'Activation (h) Zic2: sc-404720-ACT

ZIC2 code le facteur de transcription à doigts de zinc Zic2, un régulateur clé de la mise en place précoce des patrons embryonnaires et des programmes géniques du neurodéveloppement. Zic2 se lie à des éléments cis‑régulateurs pour contrôler des réseaux transcriptionnels impliqués dans la formation du tube neural, la spécification du prosencéphale et la détermination du destin cellulaire, en interagissant avec des voies qui modulent les réponses aux morphogènes et les transitions d’état de la chromatine. Une expression ou une fonction dérégulée de ZIC2 a été associée à des troubles du développement, notamment l’holoprosencéphalie, et des altérations des circuits transcriptionnels impliquant ZIC2 ont été rapportées dans de multiples contextes cancéreux. En tant que régulateur se liant à l’ADN, Zic2 constitue un nœud exploitable pour étudier les réseaux de régulation génique, la spécification des lignages et les phénotypes pilotés par des facteurs de transcription dans des modèles cellulaires humains.

Zic2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZIC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Zic2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZIC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZIC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Zic2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZIC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Zic2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Zic2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZIC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.