ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412894

Übersicht

ZFYVE28 kodiert ein FYVE-Domänen-haltiges Protein, das Phosphatidylinositol-3-phosphat auf endosomalen Membranen erkennt und dadurch die Phosphoinositid-Signalgebung mit Membrantransport und Proteinsortierung verknüpft. Über Interaktionen mit Komponenten der endozytotischen Maschinerie ist ZFYVE28 an der Regulation der Rezeptor-Internalisierung, der Endosomenreifung und der räumlichen Organisation von Signalkomplexen beteiligt. Diese Prozesse überschneiden sich mit Signalwegen, die den Turnover von Wachstumsfaktorrezeptoren und die nachgeschaltete Signaldynamik steuern, wodurch ZFYVE28 für Untersuchungen zur Signalabschwächung und zum vesikulären Transport relevant ist. Eine Fehlregulation des endosomalen Traffickings und der phosphoinositidabhängigen Sortierung ist mit veränderter zellulärer Homöostase assoziiert und wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter proliferative und neurobiologische Phänotypen.

Das ZFYVE28 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZFYVE28-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZFYVE28-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZFYVE28 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZFYVE28-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZFYVE28-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZFYVE28-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZFYVE28-Exone abzielen, die für die ZFYVE28-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZFYVE28-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZFYVE28 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZFYVE28 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZFYVE28-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZFYVE28 HDR-Plasmid (h) und ZFYVE28 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZFYVE28-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZFYVE28-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.