Plásmido CRISPR de Activación (h) ZFR: sc-407242-ACT

La ZFR humana (proteína de unión a ARN con dedos de zinc) es un factor de unión a ARN predominantemente nuclear implicado en la regulación génica postranscripcional, incluida la modulación del empalme (splicing) del pre-ARNm y el procesamiento del ARN mediante interacciones con complejos del espliceosoma y complejos ribonucleoproteicos. Al moldear el uso de isoformas de transcritos y el destino del ARN, ZFR puede influir en programas del estado celular como la proliferación, la diferenciación y la expresión génica sensible al estrés. El procesamiento del ARN desregulado es una característica común del cáncer y de los trastornos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, lo que convierte a ZFR en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de redes reguladoras de ARN. Investigar la función de ZFR puede ayudar a aclarar cómo las vías vinculadas al splicing y las proteínas de unión a ARN coordinan las salidas de expresión génica en células humanas.

ZFR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZFR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZFR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZFR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZFR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZFR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZFR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZFR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZFR en células tumorales con expresión de ZFR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.