ZFHX4 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-429838-ACT

Zfhx4 kodiert das murine Zinkfinger-Homeobox-Protein ZFHX4, einen großen DNA-bindenden Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung an der weitreichenden transkriptionellen Kontrolle beteiligt ist. ZFHX4 wird mit der Regulation der Linienfestlegung und neuronaler Differenzierungsprogramme in Verbindung gebracht und steht damit in Zusammenhang mit der Modulation des Chromatinzustands sowie der koordinierten Steuerung von Genexpressionsnetzwerken. Eine veränderte ZFHX4-Expression oder Störungen seiner Regulation wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert und in Studien zur Tumorbiologie beschrieben, was seine Relevanz für Signalwege unterstreicht, die Proliferation, Differenzierung und zelluläre Identität steuern. Diese Eigenschaften machen Zfhx4 zu einem nützlichen Ziel, um transkriptionelle Schaltkreise und krankheitsassoziierte Veränderungen der Genregulation in Mausmodellsystemen zu untersuchen.

ZFHX4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Zfhx4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZFHX4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Zfhx4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Zfhx4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZFHX4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Zfhx4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZFHX4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZFHX4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Zfhx4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.