Plasmide Double Nickase (h) ZEB: sc-400201-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ZEB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ZEB1 Double Nickase (h) et le plasmide ZEB1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ZEB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ZEB1 Antibody (416A7H10): sc-81428
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ZEB | sc-400201-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ZEB1 | sc-400201-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZEB1 code la protéine homéobox ZEB à doigts de zinc se liant aux E-box, un régulateur transcriptionnel qui se fixe à des motifs de type E-box afin de moduler des programmes d’expression génique contrôlant la transition épithélio-mésenchymateuse, la polarité cellulaire et la différenciation. Par ses interactions avec des co-répresseurs tels que CtBP et des facteurs de remodelage de la chromatine, ZEB influence des voies incluant la signalisation TGF-β/SMAD et des réseaux transcriptionnels gouvernant l’adhérence et le remodelage du cytosquelette. Une activité dérégulée de ZEB1 a été associée à des altérations de la mise en place des patrons développementaux et de la plasticité épithéliale, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes d’invasion tumorale, de phénotypes associés aux métastases et de mécanismes de résistance aux traitements. En outre, le contrôle transcriptionnel dépendant de ZEB1 contribue à des états de type souche et à des modifications de l’expression de gènes liés à l’immunité dans plusieurs modèles de maladies.
ZEB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ZEB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ZEB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ZEB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ZEB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.