ZDHHC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403195-ACT

ZDHHC2 kodiert eine Palmitoyltransferase der DHHC-Familie, die die S‑Palmitoylierung von Zielproteinen katalysiert und dadurch deren Membranassoziation, Stabilität, Transport und Signalübertragungskompetenz moduliert. Über dynamische Palmitoylierungszyklen trägt ZDHHC2 zur Regulation des vesikulären Transports, der synaptischen und immunbezogenen Signalübertragung sowie zur Organisation von Membran-Mikrodomänen bei, die die Signalstärke nachgeschalteter Signalwege beeinflussen. Eine veränderte ZDHHC2‑Aktivität und eine gestörte Palmitoylierungs-Homöostase wurden mit fehlregulierten zellulären Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, die in der Krebsbiologie und bei neurologischen Prozessen eine Rolle spielen, was ZDHHC2 zu einem geeigneten Ansatzpunkt macht, um zu untersuchen, wie Lipidmodifikationen die Proteinfunktion feinabstimmen. Als humanes, membranständiges Enzym wird ZDHHC2 häufig zusammen mit der Palmitoylierungs-/Depalmitoylierungs-Maschinerie und signalwegspezifischen Substraten untersucht, um die funktionellen Konsequenzen dieser posttranslationalen Lipidierung zu kartieren.

ZDHHC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZDHHC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZDHHC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZDHHC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZDHHC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZDHHC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZDHHC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZDHHC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZDHHC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZDHHC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.